您好,欢迎来到读书世界   登录 
书名 作者 ISBN
 

 读书世界首页 > 生物科学 > 生物化学
蛋白质组学中的蛋白质纯化手册
作  者:(澳)理查德J.辛普森主编
出 版 社: 出版年份:2009 年
ISBN:9787122018335 页数:739 页
支持介质:
图书介绍:本书是一本介绍蛋白质纯化技术手册。蛋白质组学研究的第一步是主要把蛋白质从复杂的大分子混合物中分离纯化出来。就此本书提供了全面的背景资料、理论、实验方案和实验结果的优化方法,以及疑难解答。
分享到:
图书封面及目录

第Ⅰ部分:供蛋白质组学分析的蛋白样品制备
第1章 分离科学在蛋白质组学中的作用
制备纯化蛋白:蛋白质微阵和结构蛋白质组学的瓶颈
以质谱为基础的蛋白质鉴定
蛋白质组学所面临的一个关键技术的挑战:减少样品的复杂性
本书的概述
参考文献
选读文献
网络资源
第2章 蛋白质的纯化策略
挑战
蛋白质的量和纯度要求
重组蛋白通常能简化纯化过程
可根据蛋白质的内在特性来分离蛋白质
设计蛋白质纯化方案
应用:膜相关抗原A33的纯化
参考文献
选读文献
第Ⅱ部分:蛋白质组学中制备蛋白样品的色谱方法
第3章 蛋白质和肽纯化的色谱方法导论
基本概念
色谱性能
实验方案
方案1轻拍-填装法干式填装刚性固体柱
色谱术语表
参考文献
选读文献
网络资源
第4章 全蛋白的多维色谱
MDLC用于蛋白质分级分离的目的
策略
主要文献概述
MDLC的理论参数
色谱模式:正交性与相容性
与其他技术的性能比较
MDLC的常见问题
发展潜力
样品处理方案:SEC/反相色谱法分离大肠杆菌蛋白
研究实例:MDLC分析酵母蛋白提取物
结论
参考文献
第5章 可溶性重组蛋白的高通量筛选
引言
实验方案
方案1设计平行克隆表达载体
方案2平行克隆所用载体的制备
方案3黏末端PCR产物的制备和消化载体的连接
方案4把DNA转化到细菌中
方案5诱导和筛选可溶性融合蛋白
参考文献
第6章 离子交换色谱
IEC利用了分子间的静电力
几种IEC的模式
IEC中缓冲液的选择很重要
离子交换介质和色谱分离装置
实验方案
方案1离子交换柱的选择
方案2离子交换柱的制备
方案3用IEC分离蛋白质
IEC柱的清洗
IEC的优化和常见问题
参考文献
网络资源
离子交换介质的供应商
第7章 尺寸排阻色谱
小分子更易进入凝胶介质间的空隙
分配系数Kd和有效分配系数Kav描述了溶质在特定凝胶中的洗脱情况
SEC分离相似形状分子的能力取决于凝胶的选择范围
分子的形状对其洗脱时间的影响
影响洗脱蛋白分辨率的因素
SEC在纯化方案中的作用
SEC中缓冲液、溶液和试剂的配制
SEC中蛋白样品和肽样品的预处理
SEC液相色谱装置
利用SEC分离纯化的例子
实验方案
方案1尺寸排阻色谱柱的填装
方案2尺寸排阻色谱的制备
附加方案:分析性尺寸排阻色谱
方案3用尺寸排阻色谱进行蛋白质的脱盐和缓冲液的更换
柱的清洗和保养操作
关于SEC的常见问题
参考文献
第8章 反相高效液相色谱在蛋白质分离和纯化中的应用
RP-HPLC的特点与机制
分离机制
RP-HPLC基于“疏水脚”的细微差异分离多肽
RP-HPLC柱的特点与操作
流动相
温度
表面活性剂对反相分离的影响
在质谱鉴定前用RP-HPLC分级分离多肽
RP-HPLC常见问题指南
实验方案
方案1 RP-HPLC分离蛋白质的标准色谱条件
方案2 RP-HPLC分离多肽的标准色谱条件
参考文献
选读文献
网络资源
第9章 疏水相互作用色谱
HIC与RP-HPLC的区别
HIC的基本原理
实验的影响因素
实验方案
方案1用HIC分离蛋白质
参考文献
第10章 亲和色谱与免疫亲和色谱
亲和色谱的实际应用
凝集素亲和色谱
配基亲和色谱
免疫亲和色谱
DNA亲和色谱
共价色谱
采用巯基-二硫键互换反应的共价色谱
实验方案
方案1凝集素-琼脂糖凝胶亲和色谱
方案2蛋白质配基亲和色谱
方案3制备抗体亲和树脂过程中抗体的定位
方案4 DNA亲和柱的制备
方案5 DNA亲和色谱
方案6从仅被混有不可逆失活的亚磺酸氧化产物中以可逆失活混合的二硫化物形式纯化木瓜蛋白酶
方案7以琼脂糖-谷胱甘肽-2-吡啶二硫化物凝胶作为填料的共价色谱
方案8使用活化的Thiopropyl-Sepharose 6B凝胶的共价色谱
参考文献
网络资源
第11章 蛋白质组学研究中的染料配基亲和色谱
方法的设计和优化
染料配基吸附剂的再生和储存
实验方案
方案1染料在多羟基介质中的固定化
附加方案:固定化配基浓度的测定
方案2通过结合目的蛋白的能力来筛选固定化染料
方案3吸附条件的优化
方案4洗脱条件的优化
方案5分批式试管法计算吸附剂的有效容量
方案6用染料配基亲和色谱纯化蛋白
研究实例:使用Cibacron Blue 3GA-Sepharose亲和吸附剂纯化重组甲酸脱氢酶
参考文献
第12章 固定化金属离子亲和色谱
IMAC的基本原理
IMAC的基本操作
IMAC最常用于纯化带多聚组氨酸标签的蛋白质
目的蛋白性质未知时可使用IMAC
磷蛋白和磷酸肽的分离
实验方案
方案1IMAC预装柱的准备
方案2填装IMAC柱
方案3制备含组氨酸标签蛋白的大肠杆菌澄清提取物
方案4~6的导言:在非变性条件下纯化组氨酸标签蛋白
方案4利用未经参数优化的IMAC纯化组氨酸标签蛋白
方案5优化咪唑浓度来提高蛋白质分离效率
方案6利用咪唑梯度用IMAC纯化组氨酸标签蛋白
方案7~8的导言:在变性条件下用IMAC纯化组氨酸标签蛋白
方案7变性蛋白样品的制备
方案8在变性条件下用IMAC纯化组氨酸标签蛋白
IMAC柱的清洗
IMAC柱的保存
IMAC疑难问题的解决
12.6 IMAC研究实例
参考文献
第13章 用羟磷灰石进行蛋白质色谱
基本概念
应用
实验方案
方案1用羟磷灰石结晶粉进行色谱
方案2用陶瓷羟磷灰石进行高效液相色谱
参考文献
第14章 色谱聚焦
引言
实验方案
方案1制备凝胶和柱子
方案2制备样品:变换缓冲液和脱盐
方案3利用色谱聚焦法纯化蛋白
方案4从样品组分中去除Polybuffer和Pharmalyte
方案5柱子的清洗、再生和保存
色谱聚焦研究实例
参考文献
第Ⅲ部分:蛋白质组学中制备蛋白样品的电泳方法
第15章 电泳分离蛋白质策略导论
通过制备电泳富集低丰度蛋白
第Ⅲ部分概述
参考文献
第16章 双向凝胶电泳分离蛋白质
样品的制备
预分离和亚分离操作
用IPG进行双向凝胶电泳
IPG-IEF的一般指导原则
蛋白质的显示
差示凝胶电泳
2D胶疑难问题的处理
实验方案
方案1细胞和组织样品的提取和增溶
方案2小麦种子(T.aestivum)蛋白质的顺序提取
方案3用Sephadex-IEF进行小鼠肝脏蛋白的预分离
方案4 IPG胶条用IPGphor单元来进行IEF
方案5 IPG胶条的平衡
方案6在垂直电泳单元中进行的多个SD-PAGE
方案7荧光差示凝胶电泳
参考文献
网络资源
第17章 在MCE中通过等电位分段法进行高分辨率双向凝胶电泳来制备样品
窄范围IPG可提高蛋白质分辨率
MCE将样品分成窄的等电位分段
实验方案
方案1MCE分段法
MCE血浆蛋白分段的结果
人血浆的窄范围碱性分段
玉米(ZEA MAYS)晶胚的分段
参考文献
第18章 一种电泳纯化蛋白质的方法:Gradiflow BF400仪
Gradiflow BF400仪的介绍
Gradiflow BF400仪的分离原理
用Gradiflow BF400仪进行分离的技术方案的发展
实施根据电荷进行的分离
实施根据大小进行的分离
实例分析:在蛋白质组学分析中按大小对蛋白样品进行分级分离
实验方案
方案1从血浆或血清中制备多克隆抗体
方案2从组织培养上清液中浓缩蛋白
方案3从血浆中去除清蛋白
Gradiflow BF400仪的特征
参考文献
第19章 用自由流动电泳技术纯化蛋白质
引言
实验方案
方案1天然IEF-FFE分级分离粗蛋白混合物
方案2变性IEF-FFE分级分离粗蛋白混合物
参考文献
第Ⅳ部分:用于结构蛋白质组学的纯化蛋白的分析
第20章 已纯化蛋白质鉴定方法导论
结构基因组学:是否可以从结构推知功能?
蛋白质微阵的进展
已纯化蛋白的功能完整性
第Ⅳ部分概述
参考文献
网络资源
第21章 用质谱测定蛋白质的特性
一级结构的测定
二级结构的测定:二硫键
三级结构和四级结构的测定:蛋白质构象、蛋白质折叠和蛋白质-蛋白质相互作用
参考文献
第22章 分析超速离心:蛋白质大小、构象和相互作用
分析超速离心的原理
理论
文献示例
实验上的问题
结论
参考文献
网络资源
第23章 蛋白质构象稳定性的测定
用光谱学技术追踪去折叠
通过氢交换来测定蛋白质的构象稳定性
比较由NMR和其他方法测得的ΔGu
结束语
实验方案
方案1尿素储液的制备
方案2测定尿素或盐酸胍去折叠曲线
方案3测定热去折叠曲线
方案4用NMR法测定蛋白质构象的稳定性
参考文献
第24章 表面等离子体共振与质谱联用:鉴定结合配体及描述相互作用
SPR生物传感器
配体垂钓以及应用SPR生物传感器和质谱进行鉴定
实例分析:配体垂钓以及从脑提取物中鉴定钙调蛋白
参考文献
第25章 糖蛋白中糖的分析
历史背景
聚糖与蛋白质最常用的连接是通过天冬酰胺、羟基氨基酸和GPI锚
可以用多种方法检测蛋白质的糖基化
用化学方法和酶学方法可以从糖蛋白中释放聚糖
寡糖的混合物难以分离
可以用物理方法、化学方法和酶学方法描述聚糖的结构特征
实验方案
方案1用氟化氢使糖蛋白脱糖基
方案2单糖组成分析:糖醇乙酸酯
方案3用甲醇解法分析单糖
附加方案:磷酸化糖的重氮甲烷甲基化
方案4用NaOH甲基化方法进行连接分析
参考文献
网络资源
附录1 蛋白质结构概述
附录2 蛋白质浓度的测定
附录3 蛋白质溶液的浓缩
附录4 蛋白质的储存稳定性
附录5 单向聚丙烯酰胺凝胶电泳
附录6 疑难问题解决指南
附录7 注意事项
索引
   
帮助中心   联系我们    意见反馈    在线客服
     携手著名高校图书馆之海量藏书资源,专业提供图书试读及电子书服务。
copyright 2011-2012 www.readbooks.cc 读书世界 版权所有