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蛋白质与蛋白质组学实验指南
作  者:(澳)辛普森(Simpson,R.J.)主编;何大澄译
出 版 社: 出版年份:2006 年
ISBN:9787502589236 页数:843 页
支持介质:
图书介绍:本书包括:蛋白质结构的知识、蛋白质样品和制备的各种分析方法,以及相关的支持性信息和参考资料。
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图书封面及目录

第1章 蛋白质组学导论
1.1 蛋白质组学定义
1.2 为何除基因组学外还要有蛋白质组学?
1.3 蛋白质的鉴定和分析
1.4 差异显示蛋白质组学(比较蛋白质组学)
1.5 翻译后修饰
1.6 蛋白质微阵列
1.7 捕获分子和靶分子
参考文献
网络资源
第2章 单向聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
2.2 SDS用于变性的聚丙烯酰胺凝胶
2.5 非变性PAGE(自然凝胶电泳)分离天然蛋白和蛋白复合体
2.4 三羟甲基甘氨酸SDS-PAGE分离小分子多肽
2.3 乙酸-尿素PAGE根据蛋白质的大小和电荷分离蛋白质
实验方案
方案1 蛋白质的SDS-PAGE
替代方案:用Bio-Rad 385 Gradient Former灌制线性梯度凝胶
方案2~7的导言:蛋白质显色步骤
方案2 传统的考马斯亮蓝染色
方案3 快速考马斯亮蓝染色
方案4 InstaStain Blue凝胶纸染色
方案5 SYPRO Ruby荧光染色
方案6 SYPRO Orange荧光染色
方案7 与质谱兼容的银染
方案8 表观分子量的判定
方案9 CTAB-PAGE
方案10 酸-尿素连续PAGE
方案11 肽类的电泳(Tricine-SDS-PAGE)
方案12 蛋白质的非变性PAGE
参考文献
网络资源
第3章 细胞和亚细胞提取物的制备
3.1 通过机械或化学方法破碎组织及细胞
3.2 通过变性和复性从包含体中回收重组蛋白
3.3 富含目的蛋白的亚细胞提取物的制备
实验方案
方案1 哺乳动物组织的匀浆
附加方案:从组织匀浆液中去除黏蛋白
方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解
方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解
方案4 氮舱减压法裂解培养细胞
方案5 细菌中重组蛋白的小量提取
方案6 细菌中重组蛋白的大量提取
方案7 从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白
方案8 酵母提取物的制备
方案9 真核细胞结构组分的差异去垢剂分离法
附加方案:去垢剂提取物中RNA的分离
附加方案:用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白
参考文献
选读文献
网络资源
第4章 固相化pH梯度双向凝胶电泳
4.1 双向凝胶电泳样品的制备
4.2 第一向:固相pH梯度等电聚焦电泳
4.3 第二向:根据分子量分离蛋白质
4.4 双向凝胶的染色
4.5 双向凝胶中蛋白质的转移
4.6 双向凝胶图像的获取和分析
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备
实验方案
方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备
附加方案:用放射性同位素标记真核生物细胞蛋白质
方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备
方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备
方案5 第一向:蛋白质的等电聚焦电泳
方案6 垂直SDS平板凝胶的制备:均一凝胶的灌制
方案7 垂直SDS平板凝胶制备:同时灌制多梯度凝胶
方案8 IPG胶条的平衡
方案9 第二向:蛋白质的SDS-PAGE
方案10 胶体考马斯亮蓝染色
方案11 银氨染色
方案12 与质谱兼容的银染法
方案13 用SYPRO Ruby进行荧光染色
方案14 用GelCode磷蛋白染色试剂盒对磷蛋白进行染色
方案15 双向凝胶的槽式转移
方案16 双向凝胶的半干印迹
方案17~20的导言:膜上蛋白质的染色
方案17 用丽春红S染色膜上的蛋白质
方案18 用考马斯亮蓝R250染色膜上的蛋白质
方案19 用印度墨水染色膜上的蛋白质
方案20 用胶体金染色膜上的蛋白质
网络上有关双向电泳的信息资源
参考文献
第5章 反相高效液相色谱
5.1 RP-HPLC基于疏水相互作用分离分子
5.2 RP-HPLC标准色谱条件
5.3 微柱反相色谱——适合蛋白质组学的研究方法
实验方案
方案1 蛋白质RP-HPLC的标准色谱条件
方案2 填充RP-HPLC毛细管微柱
方案3 不易分离的大分子量多肽的纯化
方案4 用RP-HPLC对固相合成的多肽进行纯化
方案5 用RP-HPLC技术对多肽和蛋白质混合物进行脱盐
方案6 计算机辅助方法优化梯度条件的RP-HPLC蛋白质分离
参考文献
选读文献
网络资源
第6章 蛋白质氨基端及羧基端序列分析
6.1 Edman降解法对多肽进行氨基端测序
6.2 限制序列分析速度的几个环节
6.3 应用HPLC和PAGE制备微量测序样品
6.4 不能进行测序的蛋白质需去封闭
6.5 磷酸化位点的微量测序分析有助于绘制信号途径
6.6 固相测序仪是回收磷酸化氨基酸的最好方法
6.8 羧基端测序方法存在的问题
6.7 其他氨基端反应法
6.9 自动化羧基端测序
6.10 高灵敏度高效率的羧基端分析
6.11 氨基端和羧基端序列组合分析
实验方案
方案1 两相柱测序仪的样品上样
方案2 将蛋白质从凝胶电转移至PVDF膜
方案3 检测PVDF膜上的蛋白质
方案4 浓缩聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质点
方案5 磷酸化多肽的固相微量测序
方案6 羧基端序列分析
单位换算指南
参考文献
选读文献
网络资源
第7章 电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析
7.1 制备肽谱的微量方法和大规模方法
7.2 消除蛋白质分子内部的共价交联以提高肽谱质量
7.3 酶法和化学法裂解多肽链
7.4 基于SDS-PAGE的肽谱制备方法(Cleveland法)
7.5 肽谱用于确定蛋白质中的二硫键
7.6 应用RP-HPLC制备肽谱
实验方案
方案1 蛋白质的过甲酸氧化
方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化:大规模方法
方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化:微量方法
方案4 用Ellman试剂测定自由巯基和二硫键
方案5 蛋白质的胰酶消化
附加方案:用琥珀酸酐修饰赖氨酰侧链
附加方案:用柠檬酸酐修饰赖氨酰侧链
方案6 用溴化氰切割Met-X键
方案7 用羟胺切割Asn-Gly键
方案8 邻亚碘酰苯甲酸在色氨酸处切割
方案9 胶内蛋白质的考马斯亮蓝染色
方案10 胶内蛋白质的锌/咪唑负染色
方案11 胶内蛋白质的硝酸银染色
方案12 胶内蛋白质的S-吡啶乙基化
方案13 胶内蛋白质的酶解和肽段提取
方案14 电印迹膜上的蛋白质消化
方案15 标准条件下肽段的反相HPLC
方案16 SDS-PAGE肽谱作图方法(Cleveland法)
方案17 原位SDS-PAGE肽谱作图方法(Cleveland法)
蛋白酶和肽酶命名法
参考文献
选读文献
网络资源
第8章 质谱在蛋白质组学中的应用
8.1 基本原理
8.2 现代离子化方法:离子如何形成
8.3 串联质谱仪
8.4 串联质谱仪的质量分析器结构
8.5 质谱与蛋白质分离方法联用进行蛋白质混合物的分离和分析
8.6 体内及体外标记方法:质谱用于定量和表达蛋白质组学
8.7 利用MS数据鉴定蛋白质的搜索引擎
8.8 总结
实验方案
方案1 蛋白质和多肽MALDI-MS分析的一般方法
方案2 反相微型层析柱的制备
方案3 固定化酶微型层析柱的制备
方案4 用于蛋白质组分析的微毛细管HPLC色谱及ESI一体化装置的制备和使用
方案5 利用Nano-LC耦联MS/MS分析复杂蛋白质混合物
方案6 利用多维蛋白质鉴定技术分析复杂蛋白质混合物
附加方案:用于MuDPIT分析的不溶性蛋白样品的消化
方案7 二维色谱和质谱结合分离多肽混合物:离线方法
方案8 通过肽的半胱氨酰化捕获蛋白质
方案9 蛋白质的同位素亲和标签
方案10 定量蛋白质组学的体内蛋白质同位素标记
方案11 利用脱水胰酶亲和捕获蛋白质
方案12 应用分子扫描器进行蛋白质组分析
方案13 利用化学印刷法进行肽质量指纹图谱分析
利用MS/MS进行“自上而下”的蛋白质序列分析
气相质子化肽段的裂解机理
参考文献
网络资源
第9章 用蛋白质组学方法绘制磷酸化位点图谱
9.1 完整磷酸化蛋白的检测和分析
9.2 通过蛋白质的裂解获得磷酸化蛋白多肽
9.3 用MS或MS/MS来确定磷酸化蛋白的特性
9.5 对磷酸化蛋白特征进行分析的多维策略
9.4 用MS/MS对磷酸化多肽进行测序
9.6 用于磷酸化多肽序列分析的MS和MS/MS技术的出现
9.7总结
实验方案
方案1 用带有Fe(Ⅲ)和Ga(Ⅲ)的IMAC纯化磷酸化多肽
附加方案:用于样品去盐的微柱和Nanoscale IMAC的制备和使用
方案2 在MALDI分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理
方案3 结合固定化金属离子亲和介质和MALDI-TOF-MS直接分析方法对磷酸化多肽进行特征分析
方案4 离线micro-IMAC富集磷酸化蛋白
方案5 用μLC-ESI-MS/MS对磷酸化多肽进行分析
方案6 MALDI-MS确定酪氨酸磷酸化位点
方案7 用ESI-MS确定丝氨酸、苏氨酸的磷酸化位点
附加方案:用放射性磷酸盐确定自发磷酸化位点
方案8 用ESI-MS确定组氨酸磷酸化位点
参考文献
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第10章 蛋白质复合体性质的研究
10.1 mRNA的选择性剪接对蛋白质产物活性的特定影响
10.2 用相互作用组描述生理复合体
10.3 利用酵母双杂交分析与蛋白质组学方法研究蛋白质间相互作用
10.4 用亲和捕获技术分析蛋白质相互作用
10.5 了解多蛋白质复合体的结构
10.6 FRET分析体内蛋白质相互作用
10.7 通过测定结合常数来分析蛋白质间相互作用
10.8 蛋白质微阵列促进大规模的蛋白质研究
实验方案
方案1 用FLAG抗原表位标记蛋白质进行蛋白质免疫共沉淀
方案2 细胞裂解液中相互作用蛋白的亲和纯化
方案3 多蛋白质复合体的非变性琼脂糖凝胶电泳
方案4 BN-PAGE蛋白质分析法
方案5 采用交联法和质谱法对蛋白质复合体进行拓扑学分析
方案6 亚秒级光交联:用水溶性金属复合体监控蛋白质-蛋白质相互作用
方案7 位点特异性蛋白质-DNA光交联法:分析蛋白质-DNA和多蛋白质-DNA复合体的结构组成
方案8 用FRET法分析体内蛋白质的相互作用
方案9 用GFP嵌合体监控蛋白质-蛋白质相互作用
方案10 蛋白质阵列:显微镜玻片的制备
方案11 蛋白质阵列:标记蛋白并通过阵列检测来研究蛋白质蛋白质相互作用
附加方案:如何防止产生拖尾
方案12 蛋白质阵列:标记复合体并通过阵列检测来研究蛋白质-小分子相互作用
方案13 蛋白质阵列:阵列的探针标记方法及激酶-底物相互作用的放射性印迹检测
方案14 蛋白质阵列:用“三明治法”研究复合体溶液
参考文献
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第11章 蛋白质组学实验结果的诠释:利用生物信息学发现蛋白质的结构、功能
及其相互作用
11.1 基因及其同源体的识别
方案1 利用Gapped-BLAST对一条长肽段进行简单序列查找
方案2 用双向最佳匹配法快速识别直源体
11.2 预测蛋白质的结构和功能
11.3 蛋白质在通路中的定位和蛋白质细胞功能的识别
方案3 用基因融合假说寻找功能相关联的蛋白质——基于结构域的搜索
方案4 操纵子的快速识别
方案5 通过系统发育谱的比较发现功能相关联的蛋白质
方案6 从DNA微阵列数据中发现功能相关联的蛋白质
参考文献
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附录1 参考图表
附录2 技术
附录3 注意事项
附录4 供应商
索引
   
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